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　　本发明涉及生物，尤其涉及一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽及其组合物的应用。

　　1、皮肤衰老是指随着年龄增长，皮肤逐渐失去弹性和紧致度的过程。它是由多种因素引起的，包括自然衰老、环境因素、生活方式和遗传等。随着人们生活水平的提高，皮肤衰老受到社会广泛关注。老化的皮肤的主要特征是表皮变薄，真表皮连接处变平和真皮细胞外机制的降解。弹性蛋白作为细胞外基质中除了胶原蛋白外第二大类蛋白，在皮肤衰老中起重要的作用，它的降解和破坏回造成皮肤弹性减退，皮肤松垂，皱纹等症状。

　　2、弹性蛋白目前的主要来源是动物组织提取，通过收集富含弹性蛋白的组织或生物样品，如动物的血管，皮肤，肺组织等，组织粉碎后使用化学方法或高温处理的方法去除非弹性蛋白成分，如胶原蛋白等，然后在于溶剂混合，在一定的温度条件下进行溶解和提取，是弹性的那白溶解并释放到溶液中，然后再经过过滤，层淀，洗涤和纯化得到纯度较高的弹性蛋白。提取的弹性蛋白，在分子量与结构上保持了天然蛋白的最大相似性，但是提取过程中的免疫原性，病毒隐患，以及提取蛋白序列的单一性都是弹性蛋白在化妆品和医用材料中应用的难点。近年来，陆续有不少利用基因重组技术合成的弹性蛋白，如专利号cn8.9利用酿酒酵母合成弹性蛋白关键六肽gvgvap的重复序列，该弹性蛋白片段具有良好的生物相容性，抗氧化特性和还原性。如cn3.1记载的一种利用大肠杆菌合成弹性蛋白(vptgig)25重复序列的方法，该方法纯化简单，为药物载体提供了新的类型。cn8.4公开了一个由大肠杆菌生物合成的弹性蛋白重复序列(vapgvg)3s，串联重复3-7次的片段，被证明具有较高的超氧自由基清除活性。

　　3、然而，在现有技术当中仍然存在着成本投入高，不利于大规模生产等技术问题，亟需要一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽及其组合物的应用来解决该类问题。

　　1、本发明提供了一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽及其组合物的应用，以解决现有技术的上述问题。

　　2、本发明公开了一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽，重组人源弹性蛋白肽包含弹性蛋白肽氨基酸序列seq id:1或包含seq id:1的片段，所述片段包含seq id:1的30％，或片段包含seq id:1的30％以上，或上述序列的突变体。

　　3、在优选的技术方案中，所述重组人源弹性蛋白肽序列的n端和/或c端包含融合蛋白序列。

　　5、在优选的技术方案中，蛋白标签为his标签、谷胱甘肽巯基转移酶标签、麦芽糖结合蛋白标签、sumo标签、nusa标签、trxa标签与dsba标签其中的一种。

　　6、作为优选的技术方案，所述重组人源弹性蛋白肽由宿主进行表达；所述宿主为细菌、真菌与真核生物细胞其中一种。

　　7、在优选的技术方案中，所述细菌为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌与红平红球菌其中一种；所述真菌为毕赤酵母、酿酒酵母与米曲霉中的一种；所述真核生物细胞为昆虫细胞、cho细胞、小鼠细胞与人细胞其中一种。

　　10、在优选的技术方案中，所述重组人源弹性蛋白肽为外泌表达，其前体蛋白包含分泌信号肽序列。分泌信号肽是引导新合成的蛋白质向分泌通路转移的短肽。在分泌到细胞外的成熟蛋白中，分泌信号肽被信号肽酶切除。

　　11、在优选的技术方案中，所述重组人源弹性蛋白肽由毕赤酵母或酿酒酵母其中的一种进行外泌表达。

　　12、在优选的技术方案中，所述重组人源弹性蛋白肽的前体蛋白包含酿酒酵母交配因子α的信号肽序列，所述交配因子α的信号肽的氨基酸序列如seq id no.2所示。

　　13、在优选的技术方案中，编码所述重组人源弹性蛋白肽的基因包括人源弹性蛋白基因的cdna序列中编码该弹性蛋白肽的片段和人工合成基因。

　　14、在优选的技术方案中，所述重组人源弹性蛋白肽为外泌表达，其基因编码所述重组人源弹性蛋白肽的前体，表现为其基因包括编码信号肽的核苷酸序列和编码重组人源弹性蛋白肽的核苷酸序列。

　　15、在优选的技术方案中，编码所述重组人源弹性蛋白肽的基因序列为经过密码子优化的人工合成基因序列。密码子优化是一种通过避免稀有密码子和利用偏爱密码子、简化mrna的二级结构，优化重复序列、调整gc含量等方法重新设计基因序列，以提高翻译效率，进而调高蛋白表达水平的方法。

　　16、在优选的技术方案中，，编码弹性蛋白肽的人工合成基因由编码信号肽和弹性蛋白肽的核苷酸序列进行密码子优化后合成得到。

　　17、在优选的技术方案中，编码弹性蛋白肽的人工合成基因由编码信号肽、弹性蛋白肽和c端his标签的核苷酸序列进行密码子优化后合成得到。

　　18、在优选的技术方案中，所述编码弹性蛋白肽人工合成基因的核苷酸序列如seq idno.3所示。

　　19、在优选的技术方案中，编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因通过启动子启动表达。启动子包括诱导型启动子与组成性启动子。

　　20、在优选的技术方案中，编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因通过诱导型启动子启动表达。

　　21、在优选的技术方案中，编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因通过组成型启动子启动表达。

　　22、在优选的技术方案中，所述编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因导入宿主细胞中。

　　23、在优选的技术方案中，所述编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因位于可动元件上。在优选的技术方案中，所述可动原件为质粒。

　　24、在优选的技术方案中，所述编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因整合到宿主基因组中。

　　25、本发明还公开了一种制备从发酵培养物中制备具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽的方法，包括下列步骤：

　　26、1)含有编码重组人源弹性蛋白肽或其前体蛋白的基因的宿主细胞进行发酵；

　　28、对于细胞内表达的发酵物，从细胞裂解液中制备重组人源弹性蛋白肽；对于外泌表达的发酵物，从发酵上清液中制备重组人源弹性蛋白肽。

　　30、在优选的技术方案中，采用如下方法进行蛋白纯化：对于细胞内表达的发酵物，裂解，将裂解液于低温离心机内离心，保留上清液；对于外泌表达的发酵物，将发酵物于低温离心机内离心，保留上清液；

　　31、将获得的上清液，用0.45μm滤膜过滤，之后通过亲和层析柱进行蛋白纯化，获得具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽。

　　36、s4、将洗脱下来的样品分别进行sds-page胶分析是否有目的蛋白。

　　37、本发明还公开了一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽组合物，所述组合物中所述重组人源弹性蛋白肽0.01～5％，其余为配方剂。

　　38、所述配方剂包括以下质量百分比成分：螯合剂0.05～1重量份，增稠剂0.1～0.5重量份，多元醇3.0～6.0重量份，植物油脂2～5重量份，高熔点脂肪化合物1～3重量份，皮肤滋润剂3～20重量份，乳化剂2～10重量份，防腐剂1～3重量份，ph调节体系至6.0～7.0，其余用水补足至100重量份。

　　39、一种具有抗衰功效的重组人源弹性蛋白肽组合物在制备护肤品、皮肤修复敷料、植入剂、人工皮肤、医疗器械、生物材料中的应用。

　　41、本发明利用毕赤酵母发酵合成了人源弹性蛋白的功能片段，该片段可以显著促进自身弹性蛋白基因和纤连蛋白基因的合成，同时可以显著促进真皮表皮交界层的胶原蛋白iv和vii基因的合成。

　　42、抗uv实验证明，该重组人源弹性蛋白片段，可以保护弹性蛋白，胶原蛋白i，iv和vii不被紫外线破坏。临床实验证实，含有1％该重组弹性蛋白片段的乳液，可以显著改善真皮的密度和弹性，同时皮肤的水润性和皮肤粗糙度也得到了显著的改善。

　　43、本发明采用基因重组技术，接入毕赤酵母的基因组，利用毕赤酵母的表达系统，高效合成弹性蛋白的从第85个氨基酸开始后面的连续100个氨基酸片段，再通过分离纯化的方式得到高纯度的重组弹性蛋白。

　　44、该方法可以定向合成高功效片段的，100％人同源的序列，同时又可以做到低成本，易于大规模生产，避免动物来源，同时避免病毒隐患。使得该重组人源弹性蛋白可以安全的使用在化妆品中作为抗衰抗光老的功效成分，同时也为其在生物医疗材料领域的应用提供支持。

　　1.CRISPR-Cas系统 2.基因编辑 3.基因修复 4.天然产物合成 5.单分子技术开发与应用

　　1.探索新型氧化还原酶结构-功能关系，电催化反应机制 2.酶电催化导向的酶分子改造 3.纳米材料、生物功能多肽对酶-电极体系的影响4. 生物电化学传感和生物电合成体系的设计与应用。

　　1.环境纳米材料及挥发性有机化合物（VOCs）染物的催化氧化 3.低温等离子体 4.吸脱附等控制技术

　　1.高分子材料改性及加工技术 2.微孔及过滤材料 3.环境友好高分子材料

　　1.高分子材料的共混与复合 2.涉及材料功能化及结构与性能的研究； 高分子热稳定剂的研发